藥品安全性和有效性評價

貧血是指人體外周血紅細胞容量減少，低于正常范圍下限的一種常見的臨床癥狀。溶血性貧血是由于紅細胞的破壞增速、增多，超過造血補償能力范圍時所發生的一種貧血。斑馬魚造血系統的形成，包括紅系、髓系、淋系及巨核系為主的造血系統，其相關的轉錄因子及信號轉導通路同人類有高度的同源性，這些特點使斑馬魚在人類造血系統和血液疾病的研究中有著更加大量的應用。研究表明，苯肼是一種溶血劑。苯肼作用于紅細胞膜，加速膜表面亮氨酸、賴氨酸及組氨酸的水解，使大量紅細胞迅速遭到破壞；同時可選擇性地氧化膜骨架和α珠蛋白，并將磷脂酰絲氨酸易位至紅細胞表面，導致紅細胞變形性降低，增強紅細胞黏附到細胞外基質的能力從而破壞循環血中的成熟紅細胞，使血紅蛋白變性聚集、形成Heinz小體，使得紅細胞的破壞速度遠大于機體紅細胞再造的能力，導致機體發生溶血性貧血。用鄰聯茴香胺染色法對紅細胞進行特異性染色（呈紅色），貧血斑馬魚心臟部位的紅細胞較正常斑馬魚明顯減少。由于斑馬魚早期出現血液循環時胚胎透明，在解剖顯微鏡下可以觀察到。斑馬魚模型評價基因毒品安全性和有效性評價

我們將受測試斑馬魚分成三組，分別是正常對照組、模型對照組和改善貧血藥物組。其中正常對照組未攝入苯肼，模型對照組與改善貧血藥物組都攝入了等量的苯肼（苯肼通過溶解到養魚用水中的方式攝入到斑馬魚體內）。服用改善貧血藥物組先攝入生血寧之類的改善貧血藥物后，再加入苯肼。服用改善貧血藥物一段時間后，再加入苯肼共同處理一段時間。我們對斑馬魚整體做紅細胞特異性染色，經過分析斑馬魚的紅細胞數量（染色強度）。可以看到，模型對照組紅細胞數量（染色強度）較正常對照組明顯減少，服用改善貧血藥物組的紅細胞數量（染色強度）與正常對照組比較相似，沒有明顯的紅細胞減少情況。藥物體外實驗藥物臨床前研究實驗。

正常成人的心率在每分鐘60～100次之間，如果低于60次稱為心動過緩，是心律失常的一個重要類型，患者平時有頭暈、乏力、倦怠、精神差的癥狀。研究表明，斑馬魚心血管系統的發育與人高度相似，雖然斑馬魚是單心房單心室，但其心臟結構及功能與人高度保守。同時，由于斑馬魚具有透明易觀察等優點，開始被大量應用于心血管疾病研究和藥物心血管毒性評價當中。維拉帕米能阻滯心肌細胞慢通道，抑制Ca2+向細胞的內流，阻礙心臟慢反應電活動，降低舒張期去極化速度，抑制竇房結的自律性，減慢心率；亦能延長房室結的有效不應期，減慢房室傳導。用解剖顯微鏡下觀察斑馬魚心率，模型對照組斑馬魚心率較正常斑馬魚明顯減慢。

斑馬魚的基因與人類基因的相似度達到87％，斑馬魚肝臟中有許多與哺乳動物同源的脂質代謝酶，與哺乳動物對外源化學物質的防御機制相當，包括酶的誘導和氧化應激。而且斑馬魚幼魚通體透明，容易觀察到毒性表型。酒精性肝損傷是全世界發病率和死亡率的主要原因，酒精性肝損傷是過量飲酒的結果。當患者繼續飲酒時，會誘發嚴重的肝損傷形式，如脂肪性肝炎，纖維化，肝硬化和肝細胞。用乙醇可以誘發斑馬魚肝臟損傷，模擬人的肝臟疾病。我們評價斑馬魚肝臟毒性有4個指標：1.肝臟面積；2.肝臟變性程度；3.卵黃囊吸收延遲的發生率（卵黃囊是脂肪，卵黃囊吸收與肝功能密切相關）；4.肝臟病理切片。利用斑馬魚模型評價糖尿病神經炎癥消退功效。

利用斑馬魚模型評價抗氣滯血瘀型血栓作用【評價原理】斑馬魚的基因與人類基因的相似度達到87％，斑馬魚血液系統與人類血液系統的血小板和凝血因子有許多共同點。大劑量腎上腺素（AH）能夠引起動物血管內皮損傷和血小板活性增強，造成體內處于高凝狀態。腎上腺素的大量增加模擬人體暴怒、大怒，導致氣機阻滯，氣滯血瘀。經過特異性紅細胞染色（鄰聯茴香胺染色），患有血栓的斑馬魚在尾部靜脈會布滿紅細胞，可以明顯被觀察到。本實驗證實了阿司匹林和氯吡格雷具有明顯抗血栓作用。斑馬魚評價胃腸道粘膜損傷輔助保護功效。動物藥理學試驗報告

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斑馬魚和哺乳動物的心臟有相似的功能，包括血流方向、由專門的心內膜肌肉組織驅動的高壓系統、由電子系統調節的心律以及與起搏活動相關的心跳。斑馬魚對典型的心臟的藥理學反應與人類相似。斑馬魚受精后48h，心血管系統功能全，呈現出例子通道和代謝過程的復雜性。因此，可以應用斑馬魚評價藥物對心衰的防治作用。維拉帕米是苯烷胺類鈣離子拮抗劑,其誘導心力衰竭的藥理學基礎有以下三方面:（1）對心臟的抑制作用,即負性頻率、負性傳導及負性肌力作用,且為劑量依賴性;（2）擴張血管作用,即對外周血管具有明顯的擴張作用,使外周阻力降低,平均動脈壓下降;（3）減少冠脈血流,降低心肌血供。我們用維拉帕米建立斑馬魚心衰模型。患有心衰的斑馬魚與正常斑馬魚比較，出現心包水腫、靜脈瘀血、心搏出量減少和血流速度減慢，由于斑馬魚通體透明的特點，可以明顯被觀察到。藥品安全性和有效性評價

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